### R code from vignette source 'QDNAseq.Rnw' ################################################### ### code chunk number 1: QDNAseq.Rnw:22-23 ################################################### library(QDNAseq) ################################################### ### code chunk number 2: QDNAseq.Rnw:26-28 ################################################### options("QDNAseq::verbose"=NA) options(width=40) ################################################### ### code chunk number 3: QDNAseq.Rnw:65-77 (eval = FALSE) ################################################### ## readCounts <- binReadCounts(bins) ## # all files ending in .bam from the current working directory ## ## # or ## ## readCounts <- binReadCounts(bins, bamfiles='tumor.bam') ## # file 'tumor.bam' from the current working directory ## ## # or ## ## readCounts <- binReadCounts(bins, path='tumors') ## # all files ending in .bam from the subdirectory 'tumors' ################################################### ### code chunk number 4: QDNAseq.Rnw:88-91 ################################################### data(LGG150) readCounts <- LGG150 readCounts ################################################### ### code chunk number 5: QDNAseq.Rnw:97-98 ################################################### png("rawprofile.png") ################################################### ### code chunk number 6: rawprofile ################################################### plot(readCounts, logTransform=FALSE, ylim=c(-50, 200)) highlightFilters(readCounts, logTransform=FALSE, residual=TRUE, blacklist=TRUE) ################################################### ### code chunk number 7: QDNAseq.Rnw:105-106 ################################################### dev.off() ################################################### ### code chunk number 8: QDNAseq.Rnw:122-124 ################################################### readCountsFiltered <- applyFilters(readCounts, residual=TRUE, blacklist=TRUE) ################################################### ### code chunk number 9: QDNAseq.Rnw:126-127 ################################################### png("isobar.png") ################################################### ### code chunk number 10: isobar ################################################### isobarPlot(readCountsFiltered) ################################################### ### code chunk number 11: QDNAseq.Rnw:132-133 ################################################### dev.off() ################################################### ### code chunk number 12: QDNAseq.Rnw:151-152 ################################################### readCountsFiltered <- estimateCorrection(readCountsFiltered) ################################################### ### code chunk number 13: QDNAseq.Rnw:154-155 ################################################### png("noise.png") ################################################### ### code chunk number 14: noise ################################################### noisePlot(readCountsFiltered) ################################################### ### code chunk number 15: QDNAseq.Rnw:160-161 ################################################### dev.off() ################################################### ### code chunk number 16: QDNAseq.Rnw:175-179 ################################################### copyNumbers <- correctBins(readCountsFiltered) copyNumbers copyNumbersNormalized <- normalizeBins(copyNumbers) copyNumbersSmooth <- smoothOutlierBins(copyNumbersNormalized) ################################################### ### code chunk number 17: QDNAseq.Rnw:181-182 ################################################### png("profile.png") ################################################### ### code chunk number 18: profile ################################################### plot(copyNumbersSmooth) ################################################### ### code chunk number 19: QDNAseq.Rnw:187-188 ################################################### dev.off() ################################################### ### code chunk number 20: QDNAseq.Rnw:202-205 (eval = FALSE) ################################################### ## exportBins(copyNumbersSmooth, file="LGG150.txt") ## exportBins(copyNumbersSmooth, file="LGG150.igv", format="igv") ## exportBins(copyNumbersSmooth, file="LGG150.bed", format="bed") ################################################### ### code chunk number 21: QDNAseq.Rnw:217-219 ################################################### copyNumbersSegmented <- segmentBins(copyNumbersSmooth, transformFun="sqrt") copyNumbersSegmented <- normalizeSegmentedBins(copyNumbersSegmented) ################################################### ### code chunk number 22: QDNAseq.Rnw:221-222 ################################################### png("segments.png") ################################################### ### code chunk number 23: segments ################################################### plot(copyNumbersSegmented) ################################################### ### code chunk number 24: QDNAseq.Rnw:227-228 ################################################### dev.off() ################################################### ### code chunk number 25: QDNAseq.Rnw:241-242 ################################################### copyNumbersCalled <- callBins(copyNumbersSegmented) ################################################### ### code chunk number 26: QDNAseq.Rnw:244-245 ################################################### png("calls.png") ################################################### ### code chunk number 27: calls ################################################### plot(copyNumbersCalled) ################################################### ### code chunk number 28: QDNAseq.Rnw:250-251 ################################################### dev.off() ################################################### ### code chunk number 29: QDNAseq.Rnw:264-266 ################################################### cgh <- makeCgh(copyNumbersCalled) cgh ################################################### ### code chunk number 30: QDNAseq.Rnw:296-301 (eval = FALSE) ################################################### ## readCounts <- binReadCounts(getBinAnnotations(15)) ## readCounts <- applyFilters(readCounts) ## readCounts <- estimateCorrection(readCounts) ## readCounts <- applyFilters(readCounts, chromosomes=NA) ## copyNumbers <- correctBins(readCounts) ################################################### ### code chunk number 31: QDNAseq.Rnw:316-318 (eval = FALSE) ################################################### ## readCounts <- estimateCorrection(readCounts, ## control=loess.control(surface="direct")) ################################################### ### code chunk number 32: QDNAseq.Rnw:332-342 (eval = FALSE) ################################################### ## # load required packages for human reference genome build hg19 ## library(QDNAseq) ## library(Biobase) ## library(BSgenome.Hsapiens.UCSC.hg19) ## ## # set the bin size ## binSize <- 15 ## ## # create bins from the reference genome ## bins <- createBins(bsgenome=BSgenome.Hsapiens.UCSC.hg19, binSize=binSize) ################################################### ### code chunk number 33: QDNAseq.Rnw:359-363 (eval = FALSE) ################################################### ## # calculate mappabilites per bin from ENCODE mapability tracks ## bins$mappability <- calculateMappability(bins, ## bigWigFile='/path/to/wgEncodeCrgMapabilityAlign50mer.bigWig', ## bigWigAverageOverBed='/path/to/bigWigAverageOverBed') ################################################### ### code chunk number 34: QDNAseq.Rnw:375-379 (eval = FALSE) ################################################### ## # calculate overlap with ENCODE blacklisted regions ## bins$blacklist <- calculateBlacklist(bins, ## bedFiles=c('/path/to/wgEncodeDacMapabilityConsensusExcludable.bed', ## '/path/to/wgEncodeDukeMapabilityRegionsExcludable.bed')) ################################################### ### code chunk number 35: QDNAseq.Rnw:387-393 (eval = FALSE) ################################################### ## # load data for the 1000 Genomes (or similar) data set, and generate residuals ## ctrl <- binReadCounts(bins, ## path='/path/to/control-set/bam/files') ## ctrl <- applyFilters(ctrl, residual=FALSE, blacklist=FALSE, ## mappability=FALSE, bases=FALSE) ## bins$residual <- iterateResiduals(ctrl) ################################################### ### code chunk number 36: QDNAseq.Rnw:402-405 (eval = FALSE) ################################################### ## # by default, use all autosomal bins that have a reference sequence ## # (i.e. not only N's) ## bins$use <- bins$chromosome %in% as.character(1:22) & bins$bases > 0 ################################################### ### code chunk number 37: QDNAseq.Rnw:411-424 (eval = FALSE) ################################################### ## # convert to AnnotatedDataFrame and add metadata ## bins <- AnnotatedDataFrame(bins, ## varMetadata=data.frame(labelDescription=c( ## 'Chromosome name', ## 'Base pair start position', ## 'Base pair end position', ## 'Percentage of non-N nucleotides (of full bin size)', ## 'Percentage of C and G nucleotides (of non-N nucleotides)', ## 'Average mappability of 50mers with a maximum of 2 mismatches', ## 'Percent overlap with ENCODE blacklisted regions', ## 'Median loess residual from 1000 Genomes (50mers)', ## 'Whether the bin should be used in subsequent analysis steps'), ## row.names=colnames(bins))) ################################################### ### code chunk number 38: QDNAseq.Rnw:430-441 (eval = FALSE) ################################################### ## attr(bins, "QDNAseq") <- list( ## author="Ilari Scheinin", ## date=Sys.time(), ## organism="Hsapiens", ## build="hg19", ## version=packageVersion("QDNAseq"), ## url=paste0( ## "http://cdn.bitbucket.org/ccagc/qdnaseq/downloads/QDNAseq.hg19.", ## binsize, "kbp.SR50.rds"), ## md5=digest::digest(bins@data), ## sessionInfo=sessionInfo()) ################################################### ### code chunk number 39: QDNAseq.Rnw:451-484 (eval = FALSE) ################################################### ## # download table of samples ## server <- "ftp://ftp.1000genomes.ebi.ac.uk/vol1/ftp/" ## g1k <- read.table(paste0(server, "sequence.index"), ## header=TRUE, sep="\t", as.is=TRUE, fill=TRUE) ## ## # keep cases that are Illumina, low coverage, single-read, and not withdrawn ## g1k <- g1k[g1k$INSTRUMENT_PLATFORM == 'ILLUMINA', ] ## g1k <- g1k[g1k$ANALYSIS_GROUP == 'low coverage', ] ## g1k <- g1k[g1k$LIBRARY_LAYOUT == 'SINGLE', ] ## g1k <- g1k[g1k$WITHDRAWN == 0, ] ## ## # keep cases with read lengths of at least 50 bp ## g1k <- g1k[!g1k$BASE_COUNT %in% c("not available", ""), ] ## g1k$BASE_COUNT <- as.numeric(g1k$BASE_COUNT) ## g1k$READ_COUNT <- as.integer(g1k$READ_COUNT) ## g1k$readLength <- g1k$BASE_COUNT / g1k$READ_COUNT ## g1k <- g1k[g1k$readLength > 50, ] ## ## # keep samples with a minimum of one million reads ## readCountPerSample <- aggregate(g1k$READ_COUNT, ## by=list(sample=g1k$SAMPLE_NAME), sum) ## g1k <- g1k[g1k$SAMPLE_NAME %in% ## readCountPerSample$sample[readCountPerSample$x >= 1e6], ] ## ## g1k$fileName <- basename(g1k$FASTQ_FILE) ## ## # download fastq files ## for (i in rownames(g1k)) { ## sourceFile <- paste0(server, g1k[i, "FASTQ_FILE"]) ## destFile <- g1k[i, "fileName"] ## if (!file.exists(destFile)) ## download.file(sourceFile, destFile) ## } ################################################### ### code chunk number 40: QDNAseq.Rnw:498-499 ################################################### sessionInfo()